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sábado, 2 de febrero de 2013

DEFINICION DE ESPECTROMETRIA DE MASAS

QUE ERA LA ESPECTROMETRIA DE MASAS?

La espectrometria de masas puede utilizarse para secuenciar fragmentos pepticos e identificar proteinas

La espectrometria de masas nos permite determinar la masa exacta de proteinas intactas o de peptidos derivados de ellas por rotura enzimatica o quimica. Entonces esta informacion puede ser utilizada para buscar en la base genomica de datos, en las que se encuentran tabuladas todas las masas y los fragmentos peptidicos previstos para cada proteina.
La espectrometria de masas es una tecnica enormemente sensible que requiere muy poco material. Las masas se pueden obtener con una exactitud de un error cada un millon. El metodo de espectrometria más usado es el MALDI-TOR. En este método, los péptidos se mezclan con un ácido orgánico y entonces se secan sobre una lámina de metal o de cerámica. A continuación, la muestra es volatilizada con un láser, con lo que los péptidos se desprenden desde la lámina en forma de gas ionizado en el que una o más moléculas presentan una o más cargas positivas. Los péptidos ionizados son acelerados en un campo eléctrico y vuelan hacia un detector. El tiempo que tardan en llegar al detector depende de su masa y de su carga: los péptidos mayores se desplazan más despacion, y las moléculas con mayor carga lo hacen más rápido. La masa exacta se determina fácilmente por el análisis de los péptidos con una sola carga. La técnica de MALDI-TOR puede incluso utilizarse para medir la masa de proteínas intactas de hasta 200.000 daltons, lo que corresponde a un polipéptido de unos 2000 aminoácidos de longitud.
La espectrometria de masas también permite determinar la secuencia de aminoácidos de fragmentos peptidicos. Este método es muy útil cuando el genoma del organismo de interés no ha sido completamente secuenciado; la secuencia parcial de aminoácidos obtenida se puede usar para identificar y clonar el gen. Este método también es importante si las proteinas contiene modificaciones, como la presencia de carbohidratos, fosfatos o grupos metilo. En estos casos se puede incluso determinar que aminoacidos son las dianas de estas modificaciones.
Para obtener informacion sobre la secuencia del péptido se requieren dos espectrometros en tándem. El primero separa los peptidos obtenidos por digestion de la proteina en interes, permitiendo analizarlos uno a uno. El peptido es fragmentado de nuevo mediante colision con atomos de un gas con alta energia. El segundo espectrometro de masas separa estos fragmentos y muestra sus masas. Las diferencias de masa entre peptidos permiten deducir la secuencia de aminoacidos. Las modificaciones post-traduccionales pueden identificarse cuando el aminoacido al que estan asociadas tiene una masa superior a la esperada.
Para obtener una información sobre la estructura y la función de una proteína debemos obtener cantidades importantes de proteína para su análisis. Ello puede conseguirse con las potentes técnicas de DNA recombinante.

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